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氨基柱那些事

更新時間:2019-07-05 點擊次數(shù):7239

整個色譜柱家族中,擁有許許多多的不同特色的柱子。不同性質(zhì)的色譜柱有著其*的作用方式。表一列出了日常工作中常規(guī)使用的幾類色譜柱的作用方式:

 

表一:不同填料色譜柱的作用方式

 

從上表可以看到,我們常使用的C8/C18僅能用于反相色譜,苯基與氟苯基也基本用于反相色譜;陰/陽離子交換(SCX/SAX)顧名思義則用于離子交換色譜了;而相對更少用的CN(氰基)、NH2(氨基)、硅膠色譜柱則有多種作用方式,或者單*種方式或者混合模式。

上表中NH2(氨基柱)則比較搶眼,表現(xiàn)的像個選手。從反相到正相,包括時下熱門的HILIC,甚至于離子交換模式均可以產(chǎn)生。那么,這個選手(NH2)是否就可以替代其他色譜柱了呢?答案當(dāng)然是否定的。不僅僅在于其選擇性有很大的差異,更重要的,是氨基的色譜柱壽命普遍不長。

如果說C18是來自長壽村的,那氨基柱一定來自非洲的津巴布韋。壽命的差異不是一星半點。不同品牌的氨基柱,必然也會有壽命上的差異,但是影響更多的,是使用條件。

我們所說的氨基柱,通常是指硅膠基質(zhì)鍵合氨丙基,如圖一所示:

 

我們知道,脂肪鏈末端的氨基通常堿性較強,以正丙胺為例,可推測氨基柱末端的氨基pKa應(yīng)該也約為10:

 

我們還知道,作為硅膠基質(zhì)的色譜柱,常規(guī)使用pH范圍是2~8。過低的pH,鍵合相會斷裂,過高的pH,硅膠將溶解。該柱子固有的自身帶進的氨基便是矛盾的存在,必然會影響壽命。此外,越短的鍵合相,壽命也可能越短。

在用于正相使用過程當(dāng)中,壽命會相對好上一些。當(dāng)用于RP/HILIC模式時,特別是添加有緩沖鹽的緩沖液時,甚至某些時候測酸性很強的樣品時,便會導(dǎo)致填料流失從而大大縮短色譜柱的使用壽命。

末端的氨基極易質(zhì)子化,成為-NH3+,在分析某些帶有電負性較強基團的組分時,容易造成拖尾情況。微環(huán)境的離子強度可能也會影響色譜柱的壽命。

氨基柱是非常“復(fù)雜”和“脆弱”的色譜柱,這就要求我們必須更加細心的去維護。1、比如每次使用前先接上兩通,確保儀器系統(tǒng)中其他項目殘留的流動相已被置換*;2、比如在用于反相模式時,在開始使用前先用含有一定比例水相的不含緩沖鹽的流動相過渡,而不要直接上帶有鹽相,特別是較高鹽相的流動相——這是因為一般情況下,色譜柱都保存在純乙腈/純正相溶劑(如是正相溶劑,過渡模式需要更換,這個找機會在講過)中,不過渡的情況下很可能發(fā)生鹽析而破壞柱子,導(dǎo)致柱子壽命縮短;3、比如使用中確保不要配錯流動相,防止溶劑走空等;4、再比如使用后確保清除*柱子中的緩沖鹽,并保存在純有機相中(ACN)中;5、后需要提到的一點是,盡管4中要求沖洗*,但是并不是代表可以一直沖洗一直沖洗,壽命跟流經(jīng)柱子的流動相體積也在一定情況下成反比,我們必須找到一個經(jīng)綜合考慮后相對較優(yōu)的中間點,如果無法確認是否沖洗干凈,我們一般認為,10~20個柱體積基本上就能保證沖洗干凈。柱體積怎么算?小編之前的文章中肯定有提到,對于內(nèi)徑4.6mm的色譜柱,一個柱體積簡易的計算方式是0.1*L(柱長cm)。請記住沖洗的時間,定個鬧鐘,防止沖洗過渡而降低柱子的使用壽命。

該類柱子的使用帶來的另外一個問題是,隨著使用時間的增加,鍵合相不可避免的流失,重現(xiàn)性便會有所變化,需要特別關(guān)注。

當(dāng)然,對于該類柱子,硅膠基質(zhì)有常規(guī)的,有雜化的,有封尾的有不封尾的,壽命當(dāng)然也會表現(xiàn)的不一樣。我們關(guān)心的選擇性和價格,必然也會有一些差異。至于選哪個,小編的回答就是萬金油,適合的就是zui hao的。

關(guān)于該類色譜柱更加詳細的使用方式,還是請參考每根柱子自帶的說明書,嚴格使用,便能保護好您的柱子。

 

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