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每日小技巧——如何選擇正相色譜的條件

更新時(shí)間:2023-10-11 點(diǎn)擊次數(shù):1577

每日小技巧——如何選擇正相色譜的條件

01

什么是正相色譜

液相色譜有很多分離模式,其中正相色譜分離模式是最先被發(fā)明出來(lái)的,它的特點(diǎn)是色譜柱中的固定相的極性大于流動(dòng)相的極性。正相色譜的保留作用主要是親水作用力,流動(dòng)相的洗脫順序是從小到大,而鍵合有烷基的材料,保留主要是依賴(lài)于疏水作用,洗脫順序相反,所以叫做反相。

在正相色譜中,流動(dòng)相是弱極性的比如正己烷、石油醚等,而固定相是極性的,比如氰基、氨基、硅膠、以及HILIC和大部分手性柱都是正相色譜的范疇。

正相色譜可用于分離中性或離子樣品,但中性樣品為主。在分離離子樣品時(shí),通常在流動(dòng)相中加入二乙胺或三乙胺等堿性添加劑來(lái)分離堿性化合物或加入甲酸、乙酸、TFA等酸添加劑來(lái)分離酸性化合物。

那么在什么情況下需要使用正相色譜呢?

1)樣品在反相色譜中不保留(親水性太強(qiáng))。

2)樣品在反相色譜中保留太強(qiáng)(疏水性太強(qiáng))。

3)采用反相條件不能獲得足夠的分離度。

4)分離空間異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體。

5)期望回收大量疏水性樣品組分(主要用于制備色譜)。

6)樣品溶于非極性溶劑(若樣品直接進(jìn)樣且采用反相色譜柱會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷該色譜柱)。

02

正相色譜流動(dòng)相的選擇

一般都是用一種弱極性和強(qiáng)極性溶劑混合獲得中等極性的流動(dòng)相,然后根據(jù)目標(biāo)分離物的保留時(shí)間和分離度3倍原則去調(diào)整兩相比例和類(lèi)型,從而達(dá)到合適的保留值和分離度。

對(duì)于正相填料(如硅膠),溶劑洗脫能力由強(qiáng)到弱依次為:水>甲醇>異丙醇>乙腈>丙酮>乙酸乙酯=Ethyl ether>四氫呋喃>二氯甲烷>氯仿>甲烷>正己烷。

常用溶劑的極性順序?yàn)椋菏兔眩家淹椋辑h(huán)已烷<四氯化碳<三氯乙烯<二硫化碳<甲苯<二氯甲烷<氯仿Ethyl ether<乙酸乙酯<丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<乙腈<水<吡啶<乙酸。

對(duì)于正相色譜常用的流動(dòng)相為烷烴(正己烷、正庚烷等)-異丙醇,需要注意的是,在正相色譜中,是不用緩沖鹽的,因?yàn)檎嗌V流動(dòng)相一般只用有機(jī)溶劑,不用水相,緩沖鹽不溶解,根據(jù)樣品的結(jié)構(gòu),酸性樣品加入甲酸、乙酸、TFA等來(lái)調(diào)節(jié)pH。堿性樣品則加入二乙胺或三乙胺等來(lái)調(diào)節(jié)pH。


03

正相色譜柱的選擇

常用正相色譜柱有氰基柱、硅膠柱、二醇基柱和氨基柱,色譜柱強(qiáng)度順序?yàn)椋汗枘z柱氧化鋁>氨基柱>二醇基柱>氰基柱。異構(gòu)體分離宜采用硅膠柱。


04

月旭經(jīng)典正相色譜柱選擇指南

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