“單槍匹馬”伏癌菌，免疫親和柱新上市

更新時(shí)間：2022-11-02 點(diǎn)擊次數(shù)：1420

微信截圖_20221102103714.png

01、概述

伏馬菌素 (Fumonisin FB) 是一種霉菌毒素，是由串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme Sheld）產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物，是一類由不同的多氫醇和丙三羧酸組成的結(jié)構(gòu)類似的雙酯化合物。伏馬菌素主要污染糧食及其制品，并對(duì)某些家畜產(chǎn)生急性毒性及潛在的致癌性，有報(bào)道指出，伏馬菌素主要損害肝腎功能，能引起馬腦白質(zhì)軟化癥和豬肺水腫等，并與我國(guó)和南非部分地區(qū)高發(fā)的食道癌有關(guān)，現(xiàn)已引起世界范圍的廣泛注意。已成為繼黃曲霉毒素之后的又一研究熱點(diǎn)。

月旭科技新推出伏馬毒素（B1/B2/B3）免疫親和柱，適合于和HPLC或LC-MS結(jié)合使用，定量檢測(cè)FB1、FB2和FB3。適用于糧谷、飼料等樣本中的伏馬毒素凈化處理，提高了樣品的純度，純化后的提取液可用于不同的分析方法測(cè)定。

微信截圖_20221102103726.png

02、原理

凈化的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，伏馬毒素單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的伏馬毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過(guò)伏馬毒素免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，伏馬毒素與抗體結(jié)合，洗滌液通過(guò)免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。最后采用甲醇-乙酸洗脫伏馬毒素，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

03、凈化步驟

1）準(zhǔn)確稱取20g（精確至0.01g）粉碎的樣品；

2）先加入50mL樣品提取液混合，搖床振蕩提取30min，于4000r/min，離心5min，取出上清液于試劑瓶中；

3）將底部沉淀部分再加入50mL樣品提取液混合，以搖床振蕩提取30min，于4000r/min，離心5min，取出上清液，與前面的上清液合并混勻；

4）準(zhǔn)確移取10mL上清液，加入40mL 1.5%吐溫20-PBS稀釋，用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，備用。

5）準(zhǔn)確移取15mL混勻?yàn)V液（相當(dāng)于0.6g樣品）過(guò)親和柱。

6）3mL柱管上方堵頭直接連接20mL針筒固定后使用（柱管內(nèi)偶見(jiàn)有小氣泡屬正?，F(xiàn)象，不影響親和柱的使用）；

7）準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液，注入注射器中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過(guò)免疫親和柱；

8）先用10mL PBS沖洗柱子，再用3mL水沖洗柱子，棄去流出液，流速1秒/滴，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體，保證柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體；

9）準(zhǔn)確加入3.0mL洗脫液洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體，保證柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體。收集全部洗脫液，進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。

（注意：整個(gè)純化過(guò)程盡量不要讓柱子干燥！）